زراعة الأنسجة النباتية فيلوديندرون

نبات فيلوديندرون

فيلوديندرون هو ثاني أكبر جنس في عائلة Araceae ، حيث يوجد 480 نوعًا محصنًا بشكل حصري. إن التنوع المورفولوجي للأصناف المطورة حديثًا وعادات زراعتها بين الأنواع المختلفة يجعل أصناف فيلوديندرون مناسبة للاستخدام كنباتات مائدة للزينة أو سلال معلقة أو طواطم أو نباتات أرضية.

زراعة الأنسجة النباتية فيلوديندرون

الثقافة المخبرية هي طريقة للتكاثر اللاجنسي في ظل ظروف معقمة تستخدم قدرة كل خلية نباتية على إنتاج نفس المادة الوراثية. استخدم إنتاج نباتات الزينة هذه التقنية في إكثار النباتات بدرجة عالية من التوحيد والصحة. يتم نشر معظم النباتات التجارية من جنس فيلوديندرون عن طريق زراعة الأنسجة المختبرية.
هناك مشكلة خطيرة تتعلق بالملوثات في بدء الاستنباتات المعملية ، لأنها تتنافس بشكل إيجابي مع النباتات للحصول على العناصر الغذائية في وسط المزرعة وفي النهاية تقتل الأنسجة. لذلك ، من الضروري تطوير بروتوكولات تطهير نموذجية فعالة تقتل الكائنات الحية الدقيقة الأجنبية.
في هذا الصدد ، فإن معالجة النباتات الأم بمبيدات الفطريات ومبيدات الجراثيم قبل وضعها في المختبر وأثناء عملية تطهير نباتات نبات الفيلواندرون فعالة في تحقيق التعقيم ، لأن مسببات الأمراض المضيفة في أعضاء النبات يتم منعها والقضاء عليها.
ثقافة معقمة لثلاثة أصناف فيلوديندرون عن طريق رش النباتات الأم بـ Ridomil MZ® و Mancozeb® قبل أسبوع واحد من فصل النبات المزروع وتطهيرها بـ 70٪ من الإيثانول لمدة دقيقة واحدة ثم 1٪ محلول هيبوكلوريت الصوديوم (v / v)) المطهر. تم تحقيق 20 دقيقة من التنسيب المعقم لـ Aglaonema sp. انقع النبات المستأصل في أنثراكول لمدة 30 دقيقة ، ثم في 70٪ إيثانول لمدة دقيقتين ، وأخيراً في 20٪ و 50٪ كلوروكس لمدة 10 دقائق.
في الآونة الأخيرة ، زاد استخدام الجسيمات النانوية الفضية (AgNPs) في زراعة الأنسجة النباتية بسبب قدرتها على قتل الكائنات الحية الدقيقة التي تؤثر على الثقافات المختبرية. تنتج بروتوكولات التطهير بالراتنج نتائج معقمة جيدة أثناء إنشاء المختبر باستخدام AgNPs.
نظرًا للأهمية الاقتصادية للفيلوديندرون والحاجة إلى المغذيات الدقيقة الكافية لمزارعي هذا النبات ، كان الهدف من هذه الدراسة هو إنشاء بروتوكول لإنشاء ثقافة معقمة في المختبر لفيلوديندرون زانادو لبدء التكاثر الجماعي والاستجابة لطلب هذا النوع.

معالجة النباتات الأم بالمطهرات

تم وضع شتلات Phyllodendron التي يبلغ ارتفاعها 8 سم ، والتي تم الحصول عليها من الثقافة المختبرية والتوافق ، في أواني بحجم 6 بوصات تحتوي على Tzontel (صخرة نارية حمراء من أصل بركاني) بحجم جسيم يبلغ 5 مم. بعد الزرع ، تم رش النباتات بمنتجات مطهرة. نمت النباتات في ظروف الدفيئة. تم إجراء الرش كل أربعة عشر يومًا لمدة 11 شهرًا مع الإخصاب. تم تطبيق التغذية وفقًا لصيغة شتاينر في الماء وتمت إضافة 1 مل / لتر من ANIBAC 580® (الأمونيوم الرباعي) لمنع وجود مسببات الأمراض في السرير. تم استخدام عشرة نباتات في كل علاج.
تم استخدام وسائط استزراع Murashige و Skog مع 30 جم / لتر سكروز و 80 مجم / لتر كبريتات الأدينين والثيامين والجليسين والبيريدوكسين وحمض النيكوتين (0.5 مجم / لتر) والإينوزيتول (100 مجم / لتر). ؛ تم تعديل الأس الهيدروجيني إلى 5.7 و 7.5 جم / لتر تم استخدام أجار Merck® كعامل تبلور. كما تم استخدام قوارير سعة 100 مل مع 20 مل من وسط الزرع. تم تعقيم وسط المزرعة لمدة 18 دقيقة في الأوتوكلاف العمودي عند 1.2 كجم / سم 2 عند 120 درجة مئوية.
تم استخدام النباتات المعالجة بالمطهرات ونمت لمدة 185 يومًا بعد الزرع في إنشاء المختبر. تمت إزالة براعم الإبط من 3 إلى 5 سم ووضعها بشكل منفصل بناءً على العلاج. تم فصل الأوراق والأعناق من كل فرع وغسلها بالكثير من الماء والصابون. تم بعد ذلك غمر البراعم في محلول محضر بمبيد الفطريات Tokat® (1 مل L-1) ومبيد الجراثيم Agry-Gent Plus 5000 لمدة 30 دقيقة.بعد 30 دقيقة ، تحت ظروف معقمة ، تم غمر الإكسبلنتس في 70٪ إيثانول لمدة دقيقة واحدة ، تمت إزالة الكحول ، وأضيف 0.16٪ محلول هيبوكلوريت الصوديوم (NaOCl). تم رج المواد المستأصلة في المحلول لمدة 5 دقائق ثم غسلها ثلاث مرات بالماء المقطر المعقم. في الارتفاع تم إنشاء خمسة إإكسبلنتس في كل دورق ثقافة وحضنت عند 28 ± 2 درجة مئوية مع فترة إضاءة تبلغ 16 ساعة من الضوء و 8 ساعات من الظلام وشدة الضوء 32 ميكرولتر لكل م 2 · ثانية -1.

تحديد الملوثات

لتحديد الملوثات التي نمت خلال ثقافة الفيلوديندرون المعقمة ، تم أخذ عينة من كل نبات نباتي مصاب بإبرة تشريح معقمة. تم الحصول على 12 عزلة فطرية و عزلة بكتيرية واحدة. تم وضع كل عينة في طبق بتري مع دكستروز أجار البطاطس (PDA) وحضنت في درجة حرارة الغرفة لمدة 72 ساعة. تمت إعادة عزل الملوثات على PDA للحصول على مزارع نقية. تم تركيب الفطريات الفطرية على شرائح مع اللاكتوفينول الأزرق. لوحظ التركيب المورفولوجي للمادة الملوثة بواسطة مجهر مركب عند 40x.
تم تلقيح العزلة النقية ، التي تم تحديدها بصريًا على أنها بكتيريا ، على وسط PDA مع 2 مل / لتر 25٪ حمض اللاكتيك ووسط المزرعة مع أجار إيوزين ميثيلين الأزرق (EMB) وتم تحضينها لمدة 24 إلى 48 ساعة. كما تم إجراء العزلات في شرائح البطاطس في غرف رطبة باستخدام مناشف ورقية وماء وأطباق بتري معقمة. تم عمل خدش بإبرة تشريح معقمة وتم تلقيحها بثقافة نقية.